Zbog ugriza genetski mutiranog pauka, tinejdžer Peter Parker stekao je moći nalik na paukove: nadljudsku snagu i reflekse, sposobnost penjanja po okomitim površinama, pletenje paukolike mreže te šesto čulo za opasnost. Užasnut nasilnom smrću svog ujaka od ruke provalnika, Peter se zakune da će svoje novostečene sposobnosti iskoristiti za dobra djela, štiteći svoje sugrađane od zlikovaca. No borba protiv kriminala ubrzo ga nauči da s velikim moćima ima veliku odgovornost.
Kao student na njujorškom sveučilištu, Peter pokušava izbalansirati svoj život mrežoletača Spidermana sa svojim obavezama na fakultetu te poslom web dizajnera za tabloid Daily Bugle. Uz to ima najboljeg prijatelja, bogataša Harryja Osbourna i burnu vezu s djevojkom Mary Jane Watson. Kako bi mu život bio još malo kompliciraniji, kao Spiderman, on je odgovoran za smrt oca svog najboljeg prijatelja. Ne znajući za Peterov superherojski alter ego, Harry živi da bi se osvetio omrznutom Spider-Manu.
Kroz glasove Neil Patrick Harrisa ("Doogie Howser", "Starship Troopers"), Iana Zieringa ("Beverly Hills 90210") i pjevačice nominirane za nagradu Grammy, Lise Loeb ("House on Haunted Hill") "Spidermana" priča zapetljanu priču o studentu koji je postao super-heroj i koji pokušava izaći na kraj sa svojim neobičnim moćima istovremeno se boreći za razumijevanje javnosti i svojih prijatelja.